采用硅膠柱純化方式從細菌中提取高純的DNA或RNA
iPure Bacterial DNA&RNA Kits 采用硅膠柱純化方式,適合于從細菌培養(yǎng)液或其它樣品中快速抽提高純度的細菌DNA或RNA,操作者可以在60min完成多個樣品的提取工作。
從革蘭氏陽性菌中提取基因組DNA的實驗例:

使用本試劑盒從從革蘭氏陽性菌中提取基因組DNA,最終分別從白色念珠菌、金黃色葡萄球菌中純化得到了高純度基因組DNA,其電泳結果見圖。
注:2%瓊脂糖凝膠電泳圖;M:DL 5000 Maker(TaKaRa);1.白色念珠菌菌基因組DNA;2.金黃色葡萄球菌基因組DNA
從革蘭氏陰性菌中提取基因組DNA的實驗例:

使用本試劑盒從革蘭氏陰性菌中提取基因組DNA,最終分別從大腸桿菌、肺炎克雷伯菌中純化得到了高純度基因組DNA,其電泳結果見圖。
注:2%瓊脂糖凝膠電泳圖;M:DL 5000 Maker(TaKaRa);1.大腸桿菌基因組DNA;2.肺炎克雷伯菌基因組DNA
iPure Bacteria DNA&RNA M.tuberculosis Kits(離心柱法)
結核分枝桿菌DNA&RNA提取試劑盒是一款專門為艱難裂解的細菌(如:葡萄球菌、糞腸球菌、結核分枝桿菌)而設計的純化試劑,試劑盒中配有二氧化鋯磁珠,通過磁珠5~10分鐘的斡旋震蕩,可以將較難裂解的細胞壁破壞,短暫離心后的液體通過溶菌酶的作用,能夠得到高質量的DNA,用于后續(xù)的分子生物學分析,廣泛適用于結核分枝桿菌的DNA診斷研究。


圖中為重復20次提取分枝桿菌108,106,104CFU/ml,進行熒光定量PCR測試的結果
結核分枝桿菌
結核分枝桿菌(M.tuberculosis),俗稱結核桿菌,是引起結核病的病原菌。可侵犯全身各器官,但以肺結核為最多見。結核病至今仍為重要的傳染病。據WHO報道,每年約有800萬新病例發(fā)生,至少有300萬人死于該病。我國建國前死亡率達200-300人/10萬,居各種疾病死亡原因之首,建國后人民生活水平提高,衛(wèi)生狀態(tài)改善,特別是開展了群防群治,兒童普遍接種卡介苗,結核病的發(fā)病率和死亡率大為降低。但應注意,世界上有些地區(qū)因艾滋病、吸毒、免疫抑制劑的應用、酗酒和貧困等原因,發(fā)病率又有上升趨勢。

細胞壁結構
桿菌屬的細菌細胞壁脂質含量較高,約占干重的60%,特別是有大量分枝菌酸(mycolicacid)包圍在肽聚糖層的外面,可影響染料的穿入。分枝桿菌一般用齊尼(Ziehl-Neelsen)抗酸染色法,以5%石炭酸復紅加溫染色后可以染上,但用3%鹽酸乙醇不易脫色。若再加用美藍復染,則分枝桿菌呈紅色,而其他細菌和背景中的物質為藍色。 發(fā)現結核分枝桿菌在細胞壁外尚有一層莢膜。一般因制片時遭受破壞而不易看到。若在制備電鏡標本固定前用明膠處理,可防止莢膜脫水收縮。在電鏡下可看到菌體外有一層較厚的透明區(qū),即莢膜,莢膜對結核分枝桿菌有一定的保護作用。

iPure Bacterial DNA&RNA Magic Beads Kits (磁珠法)
Magic beads Kit 是一款能夠適用于大量樣本提取的試劑盒,該試劑盒采用溶菌酶裂解細菌細胞壁,然后通過高濃度胍鹽裂解細胞,通過高分散的硅羥基磁珠和細菌DNA結合,通過移動磁珠,洗滌蛋白,最終達到分離核酸的目的;平均每個樣品的時間小于5分鐘。
